RNA電泳
試劑：
瓊脂糖（Agarose）、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。
步驟
一 5 x MOPS-EDTA Buffer的配制（0.1 M MOPS pH7； 5mM EDTA； 10mM NaAc）
1. 稱量20.9g的MOPS，置于1L燒杯中。
2. 加700mL DEPC水溶解。
3. 用2N NaOH調(diào)節(jié)pH**7.0
4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC
5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0
6. 加DEPC水定容**1L
7. 用0.45um濾膜過濾后避光保存
二 RNA樣品處理方法
|
RNA樣品 |
X uL |
|
甲醛 |
3.5 uL |
|
甲酰胺 |
4.0 uL |
|
5 x MOPS-EDTA Buffer |
4uL |
|
6 x Loading Buffer |
3.0 uL |
|
DEPC水 |
Up to 20 uL |
混合均勻后，70°C加熱5min，迅速冷卻**室溫。（
PCR儀操作）
三 甲醛變性瓊脂糖凝膠的制備
加1g瓊脂糖到31mL DEPC水中，另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容**41mL。將溶液冷卻**60°C左右，加入9mL 37%甲醛，倒入膠槽中靜置1小時。（膠中加入EB染料）
四 電泳
混勻
電泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer電泳液，加樣，10v/cm條件下電泳約1小時。電泳期間每隔15min混勻
電泳槽中的電泳液一次。
